名稱Daoy(人髓母細胞瘤細胞)(STR鑒定正確)

　　別稱DAOY;D324Med;D-324Med;D324MED;D-324MED;D324

　　背景描述TheDaoycelllinewasestablishedin1985byP.FJacobsenoftheRoyalPerthHospitalinWesternAustralia.Thelinewasderivedfrombiopsymaterialtakenfromatumorintheposteriorfossaofa4yearoldboy.

　　種屬人

　　年齡（性別）男；4歲

　　組織來源結締組織增生性小腦髓母細胞

　　生長特性貼壁細胞

　　細胞形態上皮細胞樣

　　細胞類型腫瘤細胞

　　腫瘤類型神經母細胞瘤細胞

　　生物安全等級1

　　生長培養基MEM（含NEAA）＋10%FBS＋1%P/S

　　推薦傳代比例1:3-1:6

　　推薦換液頻率2~3次/周

　　倍增時間33.6hours,at48thpassage(PubMed=2993532);34hours(ATCC)

　　凍存條件

　　凍存液：55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

　　溫度：液氮

　　培養條件

　　氣相：空氣，95%；CO2，5%

　　溫度：37℃

　　致瘤性Yes,innudemice(Thecellsformseriallytransplantableintercranialandsubcutaneoustumors.)

　　保藏機構ATCC;HTB-186BCRJ;0325

　　運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

　　細胞處理：

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。