名稱：Hela 229(人宮頸癌細胞)(STR鑒定正確)

　　別稱HeLa-229;HeLa229

　　背景描述Relatively resistant to polioviruses.The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.This cell line can be readily adapted to growth in suspension.

　　種屬人

　　年齡（性別）女；31歲

　　組織來源子宮頸

　　生長特性貼壁細胞

　　細胞形態(tài)上皮細胞樣

　　細胞類型腫瘤細胞

　　腫瘤類型宮頸癌細胞

　　生物安全等級2

　　生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

　　推薦傳代比例1:3-1:8

　　推薦換液頻率2~3次/周

　　倍增時間~26 hours(lot 03152010),11 hours(lot 032792)(JCRB)

　　凍存條件

　　凍存液：55%基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

　　溫度：液氮

　　培養(yǎng)條件

　　氣相：空氣，95%；CO2，5%

　　溫度：37℃

　　保藏機構ATCC;CCL-2.1 CCTCC;GDC0335 ECACC;86090201 JCRB;JCRB9086

　　細胞處理：

　　1）凍存細胞的復蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。